Eskerrik asko Nature.com bisitatzeagatik.Erabiltzen ari zaren arakatzailearen bertsioak CSS laguntza mugatua du.Esperientzia onena lortzeko, eguneratutako arakatzailea erabiltzea gomendatzen dugu (edo Internet Explorer-en bateragarritasun modua desgaitzea).Bitartean, laguntza etengabea bermatzeko, gunea estilorik eta JavaScript gabe errendatuko dugu.
Biriketako fibrosi kistikoaren tratamendurako gene-bektoreak arnasbide eroaleetara bideratu behar dira, biriken transdukzio periferikoak ez baitu eragin terapeutikorik.Transdukzio birikoaren eraginkortasuna eramailearen egoitza-denborarekin zuzenean lotuta dago.Dena den, arnastean zehar, entrega-fluidoak, esate baterako, gene-eramaileak albeoloetara hedatzen dira modu naturalean, eta edozein formatako partikula terapeutikoak azkar kentzen dira mukoziliar garraioaren bidez.Arnasbideetan gene-eramaileen egonaldi-denbora luzatzea garrantzitsua da baina zaila da lortzea.Arnasbidearen gainazalera bideratu daitezkeen eramaile-konjugatutako partikula magnetikoek eskualdeko bideratzea hobe dezakete.In vivo irudiak dituen arazoak direla eta, eremu magnetiko aplikatu baten aurrean aire-azaleko partikula magnetiko txikien portaera gaizki ulertzen da.Ikerketa honen helburua sinkrotroi-irudiak erabiltzea izan da in vivo anestesiatutako arratoien trakean partikula magnetiko batzuen mugimendua ikusteko, partikula bakarren eta ontziratuen portaera-ereduak in vivo aztertzeko.Ondoren, eremu magnetiko baten aurrean partikula magnetiko lentibiralak emateak arratoi trakean transdukzioaren eraginkortasuna areagotuko ote zuen ere ebaluatu genuen.Sinkrotroi X izpien irudiek partikula magnetikoen portaera erakusten dute eremu magnetiko geldietan eta mugikorretan in vitro eta in vivo.Partikulak ezin dira erraz arrastatu aire-bide bizien gainazalean imanen bidez, baina garraioan gordailuak ikus-eremuan kontzentratzen dira, eremu magnetikoa indartsuena den tokian.Transdukzio-eraginkortasuna ere sei aldiz handitu zen partikula magnetiko lentibiralak eremu magnetiko baten aurrean ematen zirenean.Batera hartuta, emaitza hauek iradokitzen dute partikula magnetiko lentibiralak eta eremu magnetikoak hurbilketa baliotsuak izan daitezkeela gene-bektoreak bideratzeko eta transdukzio-mailak in vivo hobetzeko.
Fibrosi kistikoa (CF) CF transmembrane conductance regulator (CFTR) izeneko gene bakar baten aldaketek eragiten dute.CFTR proteina gorputz osoko zelula epitelial askotan dagoen kanal ioi bat da, arnasbideetan barne, fibrosi kistikoaren patogeniaren gune nagusia.CFTRren akatsek uraren garraio anormala, arnasbidearen gainazala deshidratatzea eta arnasbidearen gainazaleko fluido-geruza (ASL) sakonera gutxitzea eragiten dute.Era berean, mukoziliar garraioaren (MCT) sistemaren gaitasuna kaltetzen du arnasten diren partikulak eta patogenoak arnasbideak garbitzeko.Gure helburua da lentibiral (LV) gene-terapia bat garatzea, CFTR genearen kopia zuzena emateko eta ASL, MCT eta biriketako osasuna hobetzeko, eta parametro horiek in vivo neur ditzaketen teknologia berriak garatzen jarraitzea.
LV bektoreak fibrosi kistikoaren gene-terapiarako hautagai nagusietako bat dira, batez ere gene terapeutikoa betirako integra dezaketelako arnasbideetako zelula basaletan (arneetako zelula amak).Garrantzitsua da hidratazio normala eta muki-garbiketa berreskuratu ditzaketelako fibrosi kistikoarekin lotutako arnasbideen gainazaleko gene bidez zuzendutako zelula funtzionaletan bereiziz, bizitza osorako onurak lortuz.LV bektoreak arnasbide eroaleen aurka zuzendu behar dira, bertan hasten baita biriken inplikazioa CF-n.Bektorea biriketan sakonago sartzeak albeolarraren transdukzioa eragin dezake, baina horrek ez du eragin terapeutikorik fibrosi kistikoan.Hala ere, gene-eramaileak bezalako fluidoak albeoloetara migratzen dira erditu ondoren arnasten direnean3,4 eta partikula terapeutikoak azkar kanporatzen dituzte MCTek aho-barrunbean.LV transdukzioaren eraginkortasuna zuzenean lotuta dago bektoreak xede-zeluletatik hurbil mantentzen den denbora-tartearekin, zelula-hartzea ahalbidetzeko - "egoitza-denbora" 5 , zeina eskualdeko aire-fluxu tipikoek eta moco eta MCT partikulen hartze koordinatuarekin erraz laburtzen dena.Fibrosi kistikoaren kasuan, arnasbideetan LV egoitza-denbora luzatzeko gaitasuna garrantzitsua da eremu honetan transdukzio-maila handiak lortzeko, baina orain arte erronka izan da.
Oztopo hori gainditzeko, LV partikula magnetikoek (MP) bi modu osagarritan lagun dezaketela proposatzen dugu.Lehenik eta behin, iman baten bidez gidatu daitezke arnasbidearen gainazalera, bideratzea hobetzeko eta gene-eramaileen partikulak arnasbidearen eremu egokian egon daitezen laguntzeko;eta ASL) zelula-geruzara mugitzen dira 6. MPak oso erabiliak dira farmakoak emateko biderako ibilgailu gisa. elektrizitate estatikoa egotea.Minbiziaren terapiarako eremu magnetikoak 7. Beste metodo “hipertermiko” batzuk tumore-zelulak hiltzea dute helburu MPak berotuz eremu magnetiko oszilatzaileen eraginpean daudenean.Transfekzio magnetikoaren printzipioa, non eremu magnetikoa transfekzio-agente gisa erabiltzen den DNA zeluletara transferitzea hobetzeko, normalean in vitro erabiltzen da transdukzio zailak diren zelula-lerroetarako gene-bektore ez-biral eta biral ugari erabiliz. ..LV magnetotransfekzioaren eraginkortasuna LV MP in vitro entregatzearekin batera giza bronkioko epitelioaren zelula-lerro batean eremu magnetiko estatiko baten aurrean ezarri zen, transdukzioaren eraginkortasuna 186 aldiz handituz LV bektorearekin bakarrik alderatuta.LV MT fibrosi kistikoaren in vitro eredu batean ere aplikatu da, non transfekzio magnetikoak LV transdukzioa areagotu duen aire-likidoaren interfaze-kulturetan 20 faktore batean fibrosi kistikoaren esputoaren aurrean10.Hala ere, in vivo organoen magnetotransfekzioak nahiko arreta gutxi jaso du eta animalia-ikerketa gutxi batzuetan bakarrik ebaluatu da11,12,13,14,15, batez ere biriketan16,17.Hala ere, fibrosi kistikoan biriketako terapian transfekzio magnetikoaren aukerak argiak dira.Tan et al.(2020) adierazi zuenez, "nanopartikula magnetikoen biriketako entrega eraginkorrari buruzko baliozkotze-azterketa batek CFTR arnastearen etorkizuneko estrategiei bidea emango die fibrosi kistikoa duten pazienteen emaitza klinikoak hobetzeko"6.
Arnas aparatuaren gainazalean partikula magnetiko txikien portaera aplikatzen den eremu magnetiko baten aurrean ikusten eta aztertzen zaila da, eta, beraz, gaizki ulertzen dira.Beste ikerketetan, sinkronoiaren hedapenean oinarritutako fase-kontrastearen X izpien bidezko irudien (PB-PCXI) metodo bat garatu dugu ASL18 sakoneran eta MCT19 portaeran in vivo aldaketa txikiak kuantifikatzeko irudi ez-inbaditzaileak egiteko,20 gas kanalaren gainazaleko hidratazioa zuzenean neurtzeko. eta tratamenduaren eraginkortasun adierazle goiztiar gisa erabiltzen da.Gainera, gure MCT puntuazio metodoak aluminaz edo errefrakzio indize handiko beiraz osatutako 10-35 µm-ko diametroko partikulak erabiltzen ditu PB-PCXI21-ekin ikusgai dauden MCT markatzaile gisa.Bi metodoak egokiak dira hainbat partikula mota irudikatzeko, MPak barne.
Espazio- eta denbora-bereizmen handia dela eta, gure PB-PCXI-n oinarritutako ASL eta MCT entseguak oso egokiak dira partikula bakarren eta ontziratuen dinamika eta portaera-ereduak in vivo aztertzeko, MP geneak emateko metodoak ulertzen eta optimizatzen laguntzeko.Hemen erabiltzen dugun ikuspegia SPring-8 BL20B2 beamline erabiliz egindako ikerketetan oinarritzen da, zeinetan fluidoen mugimendua ikusi genuen saguen sudur- eta biriketako arnasbideetan bektore finko baten dosia eman ondoren, behatutako gure gene-espresio-eredu heterogeneoak azaltzen laguntzeko. gure genean.animalien azterketak 3,4ko dosi eramailearekin.
Ikerketa honen helburua PB-PCXI sinkrotroia erabiltzea izan da arratoi bizien trakean MPs batzuen mugimenduak in vivo ikusteko.PB-PCXI irudien azterketa hauek MP seriea, eremu magnetikoaren indarra eta kokapena probatzeko diseinatu ziren, MP mugimenduan duten eragina zehazteko.Suposatu genuen kanpoko eremu magnetiko batek emandako MF-a helburu-eremura gelditzen edo mugitzen lagunduko zuela.Azterketa horiei esker, iman-konfigurazioak ere zehaztu ahal izan ditugu, depositu ondoren trakean geratzen den partikula kopurua maximizatzen duten.Bigarren ikerketa-sail batean, konfigurazio optimo hori erabili nahi izan dugu LV-MPak arratoien arnasbideetara in vivo entregatzearen ondoriozko transdukzio-eredua erakusteko, LV-MPak arnasbideen bideratzearen testuinguruan ematea eragingo zuelakoan. LV transdukzio-eraginkortasun handitzean..
Animalien azterketa guztiak Adelaideko Unibertsitateak (M-2019-060 eta M-2020-022) eta SPring-8 Sinkrotroi Animalien Etika Batzordeak onartutako protokoloen arabera egin ziren.Esperimentuak ARRIVE-ren gomendioen arabera egin dira.
X izpien irudi guztiak Japoniako SPring-8 sinkrotroiaren BL20XU beamlinean hartu ziren, aurretik deskribatutakoaren antzeko konfigurazioa erabiliz21,22.Laburbilduz, kaxa esperimentala sinkrotroi biltegiratze eraztunetik 245 m-ra kokatu zen.Lagin-detektagailurako 0,6 m-ko distantzia erabiltzen da partikulen irudien azterketetarako eta 0,3 m-ko in vivo irudi-ikasketetarako fase-kontraste efektuak sortzeko.25 keV-ko energia duen habe monokromatiko bat erabili da.Irudiak bereizmen handiko X izpien transduktore baten bidez (SPring-8 BM3) sCMOS detektagailu batekin akoplatuta eskuratu ziren.Transduktoreak X izpiak argi ikusgarri bihurtzen ditu 10 µm-ko lodierako txinpartagailu bat erabiliz (Gd3Al2Ga3O12), eta gero sCMOS sentsorera bideratzen da ×10 (NA 0,3) mikroskopio-objektibo bat erabiliz.sCMOS detektagailua Orca-Flash4.0 (Hamamatsu Photonics, Japonia) bat zen, 2048 × 2048 pixeleko array-tamaina eta 6,5 ​​× 6,5 µm-ko pixel gordinarekin.Ezarpen honek 0,51 µm-ko pixel isotropiko eraginkorra eta gutxi gorabehera 1,1 mm × 1,1 mm-ko ikus-eremua ematen du.100 ms-ko esposizioaren iraupena aukeratu zen arnasbideen barruko eta kanpoko partikula magnetikoen seinale-zarata erlazioa maximizatzeko, arnasketak eragindako mugimendu-artefaktuak minimizatzeko.In vivo ikerketetarako, X izpien obturadore azkar bat jarri zen X izpien bidean erradiazio-dosia mugatzeko esposizioen artean X izpien izpia blokeatuz.
LV euskarriak ez dira erabili SPring-8 PB-PCXI irudi-ikasketetan, BL20XU irudi-ganberak ez duelako Biosegurtasun Maila 2 ziurtagiria.Horren ordez, tamaina, material, burdin-kontzentrazio eta aplikazio askotariko bi saltzaile komertzialetatik ondo karakterizatutako MP aukeratu ditugu, lehenik eta behin, eremu magnetikoek kristalezko kapilaretako MPen mugimenduan nola eragiten duten ulertzeko, eta ondoren. arnasbide biziak.azalera.MParen tamaina 0,25 eta 18 µm bitartekoa da eta hainbat materialez egina dago (ikus 1. taula), baina lagin bakoitzaren konposizioa, MPko partikula magnetikoen tamaina barne, ezezaguna da.Gure MCT 19, 20, 21, 23, 24 ikerketa zabaletan oinarrituta, espero dugu 5 µm-tik beherako MPak arnasbide trakealaren gainazalean ikus daitezkeela, adibidez, ondoz ondoko fotogramak kenduz MP mugimenduaren ikusgarritasuna hobetzea ikusteko.0,25 µm-ko MP bakarra irudi-gailuaren bereizmena baino txikiagoa da, baina PB-PCXI-k haien kontraste bolumetrikoa eta metatu ondoren metatzen diren gainazaleko likidoaren mugimendua detektatzea espero da.
Diputatu bakoitzaren laginak taulan.1 beirazko 20 μl-ko kapilaretan (Drummond Microcaps, PA, AEB) prestatu zen 0,63 mm-ko barne-diametroarekin.Partikula korpuskularrak uretan daude eskuragarri, CombiMag partikulak fabrikatzailearen jabedun likidoan.Hodi bakoitza likidoz erdi beteta dago (gutxi gorabehera 11 µl) eta laginaren euskarrian jartzen da (ikus 1. irudia).Beirazko kapilarrak horizontalean jarri ziren irudi-ganberako eszenatokian, hurrenez hurren, eta likidoaren ertzetan kokatu ziren.Lur arraroz, neodimioz, burdinez eta boroz (NdFeB) (N35, cat. zk. LM1652, Jaycar Electronics, Australia) 1,17 T-ko erremanentzia zuen 19 mm-ko diametroa (28 mm-ko luzera) iman bat erantsi zitzaion. transferentzia-taula bereizia lortzeko Urrunetik aldatu zure posizioa errendatzean.X izpien irudia imana laginaren gainetik 30 mm gutxi gorabehera kokatzen denean hasten da eta irudiak segundoko 4 fotogrametan lortzen dira.Irudian, imana kristalezko hodi kapilarrera hurbildu zen (1 mm inguruko distantziara) eta gero hoditik mugitu zen eremuaren indarraren eta posizioaren eragina ebaluatzeko.
Xy laginaren translazio fasean beira kapilaretan MP laginak dituen in vitro irudien konfigurazioa.X izpi-izpiaren ibilbidea puntu gorri batekin markatzen da.
MP-en in vitro ikusgarritasuna ezarri ondoren, horietako azpimultzo bat in vivo probatu zen Wistar arratoi albino eme basatietan (~ 12 aste, ~ 200 g).Medetomidina 0,24 mg/kg (Domitor®, Zenoaq, Japonia), midazolam 3,2 mg/kg (Dormicum®, Astellas Pharma, Japonia) eta butorfanola 4 mg/kg (Vetorphale®, Meiji Seika).Arratoiak Pharma (Japonia) nahasketarekin anestesiatu zituzten peritoneo barneko injekzio bidez.Anestesia egin ondoren, irudiak egiteko prestatu ziren, trakearen inguruko larrua kenduz, hodi endotrakeal bat sartuz (ET; 16 Ga-ko bena barneko kanula, Terumo BCT), eta bizkarrezurreko posizioan inmobilizatuz poltsa termiko bat zuen neurrira egindako irudi plaka batean. gorputzaren tenperatura mantentzeko.22. Irudi-plaka irudi-kutxako laginaren faseari lotu zitzaion angelu txiki batekin trakea horizontalean lerrokatzeko x izpien irudian 2a irudian erakusten den moduan.
(a) In vivo irudien konfigurazioa SPring-8 irudi-unitatean, X izpien izpiaren ibilbidea puntu gorriarekin markatuta.(b, c) Iman trakealaren lokalizazioa urrunetik egin zen ortogonalki muntatutako IP kameraren bidez.Pantailaren irudiaren ezkerreko aldean, buruari eusten dion alanbre-begizta eta ET hodiaren barruan instalatutako entrega-kanula ikus ditzakezu.
Urruneko kontrolatutako xiringa-ponpa sistema bat (UMP2, World Precision Instruments, Sarasota, FL) 100 µl beirazko xiringa erabiliz PE10 hodi batera konektatu zen (0,61 mm OD, 0,28 mm ID) 30 Ga orratz batekin.Markatu hodia, hodi endotrakeala sartzean punta trakean posizio egokian dagoela ziurtatzeko.Mikroponpa bat erabiliz, xiringa-plongailua kendu eta tutuaren punta entregatu beharreko MP laginean murgildu zen.Kargatutako erditze-hodia gero hodi endotrakealean sartu zen, punta gure esperotako eremu magnetikoaren zatirik indartsuenean jarriz.Irudiak eskuratzea gure Arduino-n oinarritutako denbora-kutxara konektatutako arnas-detektagailu baten bidez kontrolatu zen, eta seinale guztiak (adibidez, tenperatura, arnasketa, pertsiana ireki/itxi eta irudiak eskuratzea) Powerlab eta LabChart erabiliz grabatu ziren (AD Instruments, Sydney, Australia) 22 Irudiak egitean Etxebizitza erabilgarri ez zegoenean, bi IP kamera (Panasonic BB-SC382) bata bestearengandik 90°-ra gutxi gorabehera kokatu ziren eta irudietan zehar imanaren posizioa trakearekiko kontrolatzeko erabili ziren (2b, c irudia).Mugimendu-artefaktuak minimizatzeko, arnas bakoitzeko irudi bat eskuratu zen arnas-fluxuaren lautada terminalean.
Imana bigarren etapari lotuta dago, irudi-gorputzaren kanpoaldean urrun egon daitekeena.Imanaren hainbat posizio eta konfigurazio probatu ziren, besteak beste: trakearen gainetik 30°-ko angelu batean kokatuta (2a eta 3a irudietan konfigurazioak ageri dira);iman bat animaliaren gainean eta bestea behean, poloak erakarpenerako ezarrita (3b irudia)., iman bat animaliaren gainean eta beste bat behean, poloak aldarazteko ezarrita (3c irudia), eta iman bat goian eta trakearekiko perpendikularra (3d irudia).Animalia eta imana ezarri eta proban dagoen MP xiringa-ponpan kargatu ondoren, eman 50 µl-ko dosia 4 µl/seg-ko abiaduran irudiak eskuratzean.Ondoren, imana trakean zehar edo aurrera mugitzen da irudiak eskuratzen jarraitzen duen bitartean.
In vivo irudietarako iman-konfigurazioa (a) trakearen gainean iman bat 30° inguruko angeluan, (b) erakarpenerako konfiguratutako bi iman, (c) uxatzeko konfiguratutako bi iman, (d) iman bat gainean eta perpendikularra. trakea.Behatzaileak ahotik biriketara begiratu zuen trakeatik eta X izpien izpiak arratoiaren ezkerraldetik igaro eta eskuinetik irten zen.Imana arnasbidearen luzeran edo trakearen gainean ezkerrera eta eskuinera mugitzen da X izpien izpiaren norabidean.
Arnasbideetako partikulen ikusgarritasuna eta portaera ere zehaztu nahi izan dugu, arnasketa eta bihotz-taupadak nahastu ezean.Hori dela eta, irudi-aldiaren amaieran, animaliak gizatasunez eutanasi zituzten pentobarbitalaren gaindosiaren ondorioz (Somnopentyl, Pitman-Moore, Washington Crossing, AEB; ~65 mg/kg ip).Animalia batzuk irudi-plataforman utzi zituzten, eta arnasketa eta taupadak eten ondoren, irudi-prozesua errepikatu zen, MP dosi gehigarri bat gehituz arnasbideen gainazalean MP ikusten ez bazen.
Lortutako irudiak eremu laurako eta ilunerako zuzendu ziren eta, ondoren, pelikula batean muntatu ziren (20 fotograma segundoko; 15-25 × abiadura normala arnas tasaren arabera) MATLAB-en (R2020a, The Mathworks) idatzitako script pertsonalizatu bat erabiliz.
LV gene-bektorearen entregari buruzko ikerketa guztiak Adelaideko Unibertsitateko Laborategiko Animalien Ikerketa Zentroan egin ziren eta SPring-8 esperimentuaren emaitzak erabiltzea eremu magnetiko baten aurrean LV-MP ematea gene-transferentzia in vivo hobetu zezakeen ala ez ebaluatzeko. .MFren eta eremu magnetikoaren ondorioak ebaluatzeko, bi animali talde tratatu ziren: talde bati LV MF injektatu zitzaion iman jarrita, eta beste taldea LV MF imanik gabeko kontrol talde batekin injektatu zen.
LV gene-bektoreak aurretik deskribatutako metodoak erabiliz sortu dira 25, 26 .LacZ bektoreak MPSV sustatzaile eratzaileak (LV-LacZ) bultzatutako beta-galaktosidasa gene nuklear lokalizatua adierazten du, transduzitutako zeluletan erreakzio-produktu urdin bat sortzen duena, biriketako ehunaren fronteetan eta ataletan ikusgai.Titulazioa zelula-kulturetan egin zen LacZ-eko zelula positiboen kopurua eskuz kontatuz hemozitometroa erabiliz titulua TU/ml-tan kalkulatzeko.Eramaileak -80 °C-tan kriokontserbatzen dira, erabili aurretik desizoztu eta CombiMag-era lotzen dira 1:1 nahastuz eta izotzetan inkubatuz entregatu baino 30 minutuz gutxienez.
Sprague Dawley arratoi arruntak (n = 3/talde, ~ 2-3 ip anestesiatuak 0,4 mg/kg medetomidina (Domitor, Ilium, Australia) eta 60 mg/kg ketamina (Ilium, Australia) nahasketa batekin hilabete 1ean) ip ) injekzioa eta aho-kanulazio ez-kirurgikoa 16 Ga-ko bena barneko kanula batekin.Arnasbide trakealaren ehunak LV transdukzioa jasotzen duela ziurtatzeko, aldez aurretik deskribatutako perturbazio mekanikoko protokoloa erabiliz girotu zen, zeinetan arnasbide trakealaren gainazala axialki igurzten zen alanbre-saski batekin (N-Circle, nitinol harri-erauzgailua puntarik gabeko NTSE-022115) -UDH, Cook Medical, AEB) 30 p28.Ondoren, biosegurtasun kabinetean asaldura gertatu eta 10 minutura, LV-MP-ren trakea administrazioa egin zen.
Esperimentu honetan erabilitako eremu magnetikoa in vivo erradiografia-azterketa baten antzera konfiguratu zen, trakearen gainean iman berdinak destilazio-stent besarkadekin eutsita (4. irudia).LV-MP 50 µl bolumen bat (2 x 25 µl alikuota) trakeara (n = 3 animalia) entregatu zen gel-puntako pipeta bat erabiliz, aurretik deskribatu bezala.Kontrol-taldeak (n = 3 animalia) LV-MP bera jaso zuen imanik erabili gabe.Infusioa amaitu ondoren, kanula hodi endotrakealetik ateratzen da eta animalia kendu egiten da.Imana 10 minutuz geratzen da lekuan kendu aurretik.Arratoiak larruazalpeko dosi egin zitzaien meloxicam (1 ml/kg) (Ilium, Australia) eta, ondoren, anestesia kentzea 1 mg/kg atipamazol klorhidratoaren injekzio intraperitonealaren bidez (Antisedan, Zoetis, Australia).Arratoiak epel mantendu eta behatu ziren anestesiatik erabat berreskuratu arte.
LV-MP entrega-gailua segurtasun biologikoko armairu batean.Ikus dezakezu ET hodiaren Luer-lock mahuka gris argia ahotik irteten dela, eta irudian agertzen den gel-pipetaren punta ET hoditik nahi den sakoneraraino sartzen dela trakean.
LV-MP administrazio prozeduratik astebetera, animaliak gizatasunez sakrifikatu ziren 100% CO2 arnasteaz eta LacZ adierazpena gure X-gal tratamendu estandarra erabiliz ebaluatu zen.Hiru kartilago-eraztun kaudalenak kendu ziren, hodi endotrakeala jartzearen ondoriozko kalte mekanikorik edo fluidoen atxikipenik analisian sartuko ez zela ziurtatzeko.Trakea bakoitza luzera moztu zen analisirako bi erdi lortzeko eta silikonazko kautxua (Sylgard, Dow Inc) duen edalontzi batean jarri zen Minutien orratz batekin (Fine Science Tools) azalera luminala ikusteko.Transduzitutako zelulen banaketa eta izaera argazki frontalaren bidez baieztatu ziren Nikon mikroskopioa (SMZ1500) DigiLite kamera eta TCapture softwarearekin (Tucsen Photonics, Txina).Irudiak 20x handitzean lortu ziren (trakearen zabalera osorako gehienezko ezarpena barne), trakearen luzera osoa pausoz pauso bistaratzen zen, irudi bakoitzaren artean nahikoa gainjartze emanez irudiak "josteko".Ondoren, trakea bakoitzeko irudiak irudi konposatu bakar batean konbinatu ziren Composite Image Editor 2.0.3 bertsioa erabiliz (Microsoft Research) mugimendu planar algoritmoa erabiliz. Animalia bakoitzaren trakea-irudi konposatuen barruan LacZ adierazpen-eremua MATLAB script automatizatu baten bidez (R2020a, MathWorks) kuantifikatu zen, aurretik deskribatu bezala28, 0,35 <Tonabardura <0,58, Saturazioa> 0,15 eta Balioa <0,7 ezarpenak erabiliz. Animalia bakoitzaren trakea-irudi konposatuen barneko LacZ adierazpenaren eremua MATLAB script automatizatu baten bidez (R2020a, MathWorks) kuantifikatu zen, aurretik deskribatu bezala28, 0,35 <Tonu <0,58, Saturazioa> 0,15 eta Balioa <0,7 ezarpenak erabiliz. Площадь экспрессии LacZ в составных изображениях трахеи от каждого животного была количественно определена с использованием автоматизированного сценария MATLAB (R2020a, MathWorks), как описано ранее28, с использованием настроек 0,35 <оттенок <0,58, насыщенность> 0,15 и значение <0 ,7. Animalia bakoitzaren trakea-irudi konposatuetan LacZ adierazpenaren eremua MATLAB script automatizatu baten bidez kuantifikatu zen (R2020a, MathWorks) aurretik deskribatu bezala28 0,35 ezarpenak erabiliz.0,15 eta balioa<0,7.如 前所 述, 使用 使用 自动 自动 自动 Matlab 脚本 (R2020A, Mathworks) 对 来自 每 只 动物 的 气管 复合 图像 中 的 Lacz 表达 区域 进行 量化, ​​使用 区域 进行 中 量化, 使用 区域 进行 进行 量化, ​​使用 区域 进行 进行 量化, ​​使用 区域 进行 进行 量化, ​​使用 区域 进行 进行 量化, ​​使用 区域 进行 中 量化, 使用 区域 进行 中 量化, 使用 区域 进行 中 量化, 使用 色调 进行 中 的, 饱和度 色调 进行 中 的, 饱和度 色调 进行 中 的, 饱和度> 0.15 和值 <0,7 和值 <0,7 的 的.如 前所 述 ， 自动 自动 Matlab 脚本 （（r2020a ， Mathworks） 来自 每 只 的 气管 复合 图像 的 的 的 的 表达 量化 ， 使用 使用 使用 0.35 <色调 <0.58 、> 0.15 和值 <0.7 的。。。。。 .................... ALDAKA Области экспрессии LacZ на составных изображениях трахеи каждого животного количественно определяли с использованием автоматизированного сценария MATLAB (R2020a, MathWorks), как описано ранее, с использованием настроек 0,35 <оттенок <0,58, насыщенность> 0,15 и значение <0,7 . Animalia bakoitzaren trakearen irudi konposatuetan LacZ adierazpen-eremuak MATLAB script automatizatu baten bidez kuantifikatu ziren (R2020a, MathWorks) 0,35 < ñabardura < 0,58, saturazioa > 0,15 eta balioa < 0,7 ezarpenak erabiliz (R2020a, MathWorks) deskribatu bezala.GIMP v2.10.24-n ehunen sestraren jarraipena eginez, maskara bat sortu zen eskuz irudi konposatu bakoitzeko, ehun-eremua identifikatzeko eta trakea-ehunetik kanpo detektatzeko faltsurik ez izateko.Animalia bakoitzaren irudi konposatu guztien zikindutako eremuak batu ziren animalia horren zikindu-eremu osoa emateko.Margotutako eremua maskararen guztizko azalerarekin zatitu zen eremu normalizatu bat lortzeko.
Trakea bakoitza parafinan txertatu eta 5 µm-ko lodiera zatitu zen.Atalak gorri neutro azkar batekin kontrastatu ziren 5 minutuz eta irudiak Nikon Eclipse E400 mikroskopioa, DS-Fi3 kamera eta NIS elementuak harrapatzeko softwarea erabiliz lortu ziren (5.20.00 bertsioa).
Analisi estatistiko guztiak GraphPad Prism v9-n (GraphPad Software, Inc.) egin ziren.Esangura estatistikoa p ≤ 0,05ean ezarri zen.Normaltasuna Shapiro-Wilk probaren bidez probatu zen eta LacZ tindaketaren desberdintasunak paregabeko t-test baten bidez ebaluatu ziren.
1. taulan deskribatutako sei MP PCXIk aztertu zituen, eta ikusgarritasuna 2. taulan azaltzen da. Bi poliestireno MP (MP1 eta MP2; 18 µm eta 0,25 µm, hurrenez hurren) ez ziren PCXIk ikusten, baina gainerako laginak identifikatu ahal izan ziren. (adibideak 5. irudian ageri dira).MP3 eta MP4 ahul ikusten dira (% 10-15 Fe3O4; 0,25 µm eta 0,9 µm, hurrenez hurren).MP5 (% 98 Fe3O4; 0,25 µm) probatutako partikula txikienetako batzuk zituen arren, nabarmenena izan zen.CombiMag MP6 produktua zaila da bereizten.Kasu guztietan, MFak antzemateko dugun gaitasuna asko hobetu zen imana kapilararekiko paralelo batera eta bestera mugituz.Imanak kapilarretik urrundu ahala, partikulak kate luzeetan ateratzen ziren, baina imanak hurbildu eta eremu magnetikoaren indarra handitu ahala, partikula-kateak laburtu egin ziren, partikulak kapilarren goiko gainazalerantz migratzen ziren heinean (ikus S1 bideo osagarria). : MP4), gainazaleko partikulen dentsitatea handituz.Alderantziz, imana kapilaretik kentzen denean, eremuaren indarra gutxitzen da eta MPak kapilarren goiko gainazaletik hedatzen diren kate luzeetan berrantolatzen dira (ikus S2 bideo osagarria: MP4).Imanak higitzeari utzi ondoren, partikulek denbora pixka bat mugitzen jarraitzen dute oreka-posiziora iritsi ondoren.MP kapilarearen goiko gainazaletik aldera eta urruntzen doan heinean, partikula magnetikoek hondakinak likidotik atera ohi dituzte.
PCXIren azpian MPren ikusgarritasuna nabarmen aldatzen da laginen artean.(a) MP3, (b) MP4, (c) MP5 eta (d) MP6.Hemen erakusten diren irudi guztiak kapilarren gainean 10 mm gutxi gorabehera kokatutako iman batekin atera ziren.Itxurazko zirkulu handiak kapilareetan harrapatutako aire-burbuilak dira, eta argi eta garbi erakusten dituzte fase-kontrastearen irudiaren ertz zuri-beltzeko ezaugarriak.Lauki gorriak kontrastea hobetzen duen handipena adierazten du.Kontuan izan irudi guztietan iman-zirkuituen diametroak ez direla eskalakoak eta gutxi gorabehera erakusten dena baino 100 aldiz handiagoak direla.
Imana kapilarren goiko aldean ezkerrera eta eskuinera mugitzen den heinean, MP katearen angelua aldatzen da imanarekin lerrokatzeko (ikus 6. irudia), eta horrela eremu magnetikoko lerroak marrazten dira.MP3-5erako, akordeak atalase-angelura iritsi ondoren, partikulak kapilarren goiko gainazalean zehar arrastatu egiten dira.Horren ondorioz, askotan MP-ak talde handiagoetan biltzen dira eremu magnetikoa indartsuena den tokitik gertu (ikus S3 bideo osagarria: MP5).Hau bereziki nabaria da kapilarren amaieratik hurbil irudikatzen denean, eta horrek MP likido-airearen interfazean agregatu eta kontzentratzea eragiten du.MP6-ko partikulak, MP3-5ekoek baino bereizten zailagoak zirenak, ez zuten arrastatu imana kapilarean zehar mugitzen zenean, baina MP kateak disoziatu egin ziren, partikulak bistan utziz (ikus S4 bideo osagarria: MP6).Zenbait kasutan, aplikatutako eremu magnetikoa imana irudi-gunetik distantzia luzera mugitzean murrizten zenean, gainerako MPak poliki-poliki hodiaren beheko gainazalera jaisten ziren grabitatearen bidez, katean geratuz (ikus S5 bideo osagarria: MP3) .
MP katearen angelua aldatzen da imana kapilarren gainetik eskuinera mugitzen den heinean.(a) MP3, (b) MP4, (c) MP5 eta (d) MP6.Lauki gorriak kontrastea hobetzen duen handipena adierazten du.Kontuan izan bideo osagarriak informazio-helburuetarako direla, irudi estatiko hauetan ikusi ezin den partikulen egitura garrantzitsua eta informazio dinamikoa agerian uzten baitute.
Gure probek frogatu dute imana trakean zehar poliki-poliki mugitzeak MFren bistaratzea errazten duela in vivo mugimendu konplexuaren testuinguruan.Ez da in vivo probarik egin, poliestireno aleak (MP1 eta MP2) kapilarean ikusten ez zirelako.Gainerako lau MFetako bakoitza in vivo probatu zen imanaren ardatz luzea trakearen gainean kokatuta bertikalarekiko 30° inguruko angelu batean (ikus 2b eta 3a irudiak), honek MF kate luzeagoak eragin baitzituen eta eraginkorragoa zelako. iman bat baino..konfigurazioa amaitu da.MP3, MP4 eta MP6 ez dira aurkitu animalia bizien trakean.Animaliak gizatiarki hil ondoren arratoien arnasbideak ikustean, partikulak ikusezin geratzen ziren xiringa-ponpa baten bidez bolumen gehigarria gehitzen zenean ere.MP5-ek burdin oxido-edukirik handiena zuen eta ikusten zen partikula bakarra zen, beraz, MP portaera in vivo ebaluatzeko eta karakterizatzeko erabili zen.
Imana trakearen gainean jartzeak MF txertatzean MF asko, baina ez guztiak, ikus-eremuan kontzentratzea eragin zuen.Partikulen sarrera trakeala gizatasunez eutanasia duten animalietan ikusten da hobekien.7. Irudia eta S6 bideo osagarria: MP5-ek trakea bentralaren gainazaleko partikulen harrapaketa magnetiko azkarra eta lerrokatzea erakusten du, MP-ak trakearen nahi diren eremuetara bideratu daitezkeela adierazten du.MF entregatu ondoren trakean zehar distalkiago bilatzean, MF batzuk carinatik gertuago aurkitu ziren, eta horrek eremu magnetikoko indar nahikoa ez duela adierazten du MF guztiak biltzeko eta eusteko, fluidoen administrazioan eremu magnetikoen indar maximoaren eskualdean zehar eman baitziren.prozesua.Hala ere, jaio ondorengo MP kontzentrazioak handiagoak izan ziren irudiaren eremuan, eta ondorioz, MPs asko eremu magnetikoaren indarra altuena zen aire-bideetako eskualdeetan geratzen zirela iradokitzen du.
(a) eta (b) irudiak MP5 eutanasia egin berri den arratoi baten trakean sartu aurretik eta (b) irudi-eremuaren gainean kokatutako iman batekin.Irudikatutako eremua bi eraztun kartilaginosoen artean dago.Arnasbideetan likido pixka bat dago MPa eman aurretik.Lauki gorriak kontrastea hobetzen duen handipena adierazten du.Irudi hauek S6-n agertzen den bideotik hartuak dira: MP5 bideo osagarria.
Imana trakean zehar in vivo mugitzeak MP katearen angeluaren aldaketa eragin zuen arnasbidearen gainazalean, kapilarren antzera (ikus 8. irudia eta S7 bideo osagarria: MP5).Hala ere, gure azterketan, diputatuak ezin izan dira arnasbide bizien gainazalean arrastaka eraman, kapilarrek egin dezaketen bezala.Zenbait kasutan, MP katea luzatzen da imana ezkerrera eta eskuinera mugitzen den heinean.Interesgarria da, halaber, aurkitu dugu partikula-kateak fluidoaren gainazaleko geruzaren sakonera aldatzen duela imana trakean zehar luzetara mugitzen denean, eta hedatzen dela imana zuzenean gainean mugitzen denean eta partikula-katea posizio bertikal batera biratzen denean (ikus S7 bideo osagarria).: MP5 0:09an, behean eskuinean).Mugimendu-eredu bereizgarria aldatu egiten zen imana trakearen goiko aldean albotik mugitzean (hau da, animaliaren ezkerrera edo eskuinera, trakearen luzeran baino gehiago).Partikulak oraindik argi ikusten ziren mugimenduan zehar, baina imana trakeatik kendu zenean, partikulen kateen puntak ikusgai geratu ziren (ikus S8 bideo osagarria: MP5, 0:08tik aurrera).Hau bat dator beirazko kapilar batean aplikatutako eremu magnetiko baten eraginpean eremu magnetikoaren portaerarekin.
Anestesiatutako arratoi bizi baten trakean MP5 erakusten duten lagin irudiak.(a) Imana trakearen goiko eta ezkerreko irudiak eskuratzeko erabiltzen da, gero (b) imana eskuinera mugitu ondoren.Lauki gorriak kontrastea hobetzen duen handipena adierazten du.Irudi hauek S7-ren bideo osagarrian agertzen den bideokoak dira: MP5.
Bi poloak trakearen gainean eta behean ipar-hego orientazioan sintonizatu zirenean (hau da, erakargarria; 3b. irudia), MP kordak luzeagoak agertzen ziren eta trakearen alboko horman kokatzen ziren, dortsalaren gainazalean beharrean. trakea (ikus eranskina).S9 bideoa: MP5).Hala ere, gune batean (hau da, trakearen dortsal-azalera) partikula-kontzentrazio handiak ez ziren detektatu iman bikoitzeko gailu batekin fluidoa administratu ondoren, normalean iman bakarreko gailu batekin gertatzen dena.Orduan, iman bat kontrako poloak uxatzeko konfiguratu zenean (3c irudia), ikus-eremuan ikusgai dauden partikula kopurua ez zen handitu entregatu ondoren.Bi iman konfigurazio biak konfiguratzea zaila da, hurrenez hurren, imanak erakartzen edo bultzatzen dituen eremu magnetikoaren indar handia dela eta.Ondoren, konfigurazioa iman bakar batera aldatu zen, aire-bideekin paraleloan, baina aire-bideetatik 90 graduko angeluarekin igarotzen zen, indar-lerroek trakea horma ortogonalean zeharkatu zuten (3d. Irudia), partikulak agregatzeko aukera zehazteko orientazio bat. alboko horma.behatu.Hala ere, konfigurazio honetan, ez zegoen MF metaketa mugimendu edo iman mugimendu identifikagarririk.Emaitza guzti hauen arabera, iman bakarreko eta 30 graduko orientazioko konfigurazio bat aukeratu zen gene-eramaileen in vivo azterketetarako (3a. irudia).
Gizaki sakrifikatu eta berehala animaliari hainbat aldiz irudikatu ziotenean, ehunen mugimendu interferentziarik ezaren ondorioz, partikula-lerro finagoak eta laburragoak antzeman zitezkeela eremu kartilaginoso argian, 'baldintzen' imanaren translazio-higiduraren arabera.argi ikusi MP6 partikulen presentzia eta mugimendua.
LV-LacZ-ren titulua 1,8 x 108 IU/mL izan zen, eta 1:1 CombiMag MP-rekin (MP6) nahastu ondoren, animaliei 9 x 107 IU/ml LV ibilgailuaren 50 µl trakeal dosi injektatu zitzaien (hau da, 4.5 x 106 TU/arratoia).).).Ikerketa horietan, erditzean imana mugitu beharrean, imana posizio batean finkatu genuen, LV transdukzioa (a) hobetu zitekeen (a) eremu magnetikorik ezean bektore-ematearekin alderatuta, eta (b) aire-bideak zezakeen. zentratu.Goi-arnasbideetako helburu magnetikoen eremuetan transduzitzen ari diren zelulak.
Imanen presentziak eta CombiMag erabiltzeak LV bektoreekin konbinatuta ez omen zuen animalien osasunari kalterik eraginik, gure LV bektoreen entrega protokolo estandarra bezala.Perturbazio mekanikoa jasandako trakea-eskualdearen aurrealdeko irudiek (1. irudi osagarria) erakutsi zuten LV-MP tratatutako taldeak transdukzio maila nabarmen handiagoak zituela iman baten aurrean (9a. irudia).LacZ tindaketa urdin kopuru txiki bat bakarrik zegoen kontrol taldean (9b irudia).X-Gal-z tindatutako eskualde normalizatuen kuantifikazioak erakutsi zuen LV-MPren administrazioak eremu magnetiko baten aurrean 6 aldiz hobetzen zuela gutxi gorabehera (9c. irudia).
LV-MPrekin transdukzio trakeala erakusten duten irudi konposatuen adibidea (a) eremu magnetiko baten aurrean eta (b) imanik ezean.(c) Estatistikoki hobekuntza esanguratsua LacZ transdukzio eremu normalizatuan trakean iman bat erabiliz (*p = 0,029, t-test, n = 3 talde bakoitzeko, batez besteko ± batez besteko errore estandarra).
Gorriz tindatutako atal bizkor neutroek (2. irudi osagarrian erakusten den adibidea) adierazi zuten LacZ-z tindatutako zelulak lagin berean eta aurretik jakinarazitako toki berean zeudela.
Arnasbideen gene-terapiaren funtsezko erronka interes-eremuetan partikulen garraiatzaileen lokalizazioa zehatza izatea eta birika mugikorrean transdukzio-eraginkortasun maila altua lortzea izaten jarraitzen du, aire-fluxuaren eta muki garbiketa aktiboaren aurrean.Fibrosi kistikoan arnas gaixotasunak tratatzera zuzendutako LV eramaileentzat, arnasbide eroaleetan partikula eramaileen egonaldi-denbora handitzea lortu ezinezko helburua izan da orain arte.Castellani et al.-ek adierazi dutenez, transdukzioa hobetzeko eremu magnetikoak erabiltzeak abantailak ditu beste geneak emateko metodoen aldean, esate baterako, elektroporazioa, sinpletasuna, ekonomia, tokiko entrega, eraginkortasun handiagoa eta inkubazio denbora laburragoa konbina ditzakeelako.eta beharbada ibilgailuaren dosi txikiagoa10.Dena den, inoiz ez da deskribatu kanpoko indar magnetikoen eraginpean dauden partikula magnetikoen deposizioa eta portaera in vivo, eta, hain zuzen ere, metodo honek osorik gabeko arnasbideetan gene-adierazpen mailak areagotzeko duen gaitasuna ez da frogatu in vivo.
PCXI sinkrotroian egindako in vitro esperimentuek erakutsi zuten probatu ditugun partikula guztiak, MP poliestirenoa izan ezik, ikusten zirela erabili genuen irudien konfigurazioan.Eremu magnetiko baten aurrean, eremu magnetikoek kateak osatzen dituzte, eta horien luzera partikula motarekin eta eremu magnetikoaren indarrarekin (hau da, imanaren hurbiltasunarekin eta mugimenduarekin) lotuta dago.10. Irudian ikusten den bezala, ikusten ditugun kateak partikula bakoitza magnetizatu eta tokiko eremu magnetikoa eragiten duen heinean sortzen dira.Eremu bereizi hauek antzeko beste partikula batzuk bildu eta talde-kateen higidurarekin konektatzea eragiten dute, beste partikulen erakarpen- eta aldaratze-indarren tokiko indarren ondorioz.
Fluidoz betetako kapilarren barruan sortzen diren partikulen kateak (a, b) eta (c, d) airez betetako trakea bat erakusten dituen diagrama.Kontuan izan kapilarrak eta trakea ez daudela eskalara marrazten.(a) panelak kateetan antolatutako Fe3O4 partikulak dituen MFren deskribapena ere badu.
Imana kapilarren gainean mugitu zenean, partikulen katearen angelua Fe3O4 duen MP3-5en atalase kritikora iritsi zen, eta ondoren partikula katea ez zen bere jatorrizko posizioan geratzen, gainazalean zehar mugitu zen posizio berri batera.imana.Efektu hau litekeena da beirazko kapilarren gainazala nahikoa leuna delako mugimendu hori gerta dadin.Interesgarria da MP6-k (CombiMag) ez zuela horrela jokatu, agian partikulak txikiagoak zirelako, estaldura edo gainazaleko karga ezberdina zutelako edo jabedun fluido garraiatzaileak mugitzeko gaitasunari eragiten zielako.CombiMag partikulen irudiko kontrastea ere ahulagoa da, likidoak eta partikulak dentsitate bera izan dezaketela eta, beraz, ezin dutela elkarrengana erraz mugitu.Partikulak ere trabatu egin daitezke imana azkarregi mugitzen bada, eremu magnetikoaren indarrak ezin duela beti fluidoaren partikulen arteko marruskadura gainditu adieraziz, eremu magnetikoaren indarra eta imanaren eta xede-eremuaren arteko distantzia ez direla iradokitzen. sorpresa.garrantzitsua.Emaitza hauek ere adierazten dute imanek xede-eremutik igarotzen diren mikropartikula asko harrapatzen dituzten arren, nekez fidatu daitekeela imanek CombiMag partikulak trakearen gainazalean mugitzeko.Horrela, ondorioztatu genuen in vivo LV MF azterketek eremu magnetiko estatikoak erabili behar dituztela arnasbideen zuhaitzaren eremu zehatzak fisikoki bideratzeko.
Partikulak gorputzera sartzen direnean, zailak dira identifikatzea gorputzeko ehun mugikor konplexuaren testuinguruan, baina haien detektatzeko gaitasuna hobetu da imana trakearen gainean horizontalki mugituz MP kateak "mugitzeko".Denbora errealean irudikatzea posible den arren, errazagoa da partikulen mugimendua hautematea animalia gizatasunez hil ondoren.MP kontzentrazioak normalean toki honetan izan ziren altuenak imana irudi-eremuaren gainean jartzen zenean, nahiz eta normalean partikula batzuk trakean beherago aurkitzen ziren.In vitro ikerketek ez bezala, partikulak ezin dira trakean behera arrastatu iman baten mugimenduaren bidez.Aurkikuntza hau koherentea da trakearen gainazala estaltzen duen mocoak normalean arnasten diren partikulak prozesatzen dituenarekin, mukian harrapatuz eta, ondoren, muko-ziliar garbitzeko mekanismoaren bidez garbituz.
Trakearen gainean eta azpian imanak erakartzeko (3b. irudia) erabiltzeak eremu magnetiko uniformeagoa sor dezakeela planteatu genuen, puntu batean oso kontzentratuta dagoen eremu magnetikoa baino, partikulen banaketa uniformeagoa izan daitekeela..Hala ere, gure aurretiazko ikerketek ez dute hipotesi hori onartzen duten froga argirik aurkitu.Era berean, iman pare bat aldaraztea (3c. irudia) ezartzeak ez zuen irudiaren eremuan partikula gehiago finkatu.Bi aurkikuntza hauek frogatzen dute iman bikoitzeko konfigurazioak ez duela nabarmen hobetzen MP apuntatzearen tokiko kontrola, eta ondoriozko indar magnetiko indartsuak sintonizatzen zailak direla, hurbilketa hori hain praktikoa bihurtuz.Era berean, imana trakearen gainetik eta zehar orientatzeak (3d irudia) ere ez zuen handitu irudiko eremuan geratzen ziren partikulen kopurua.Baliteke konfigurazio alternatibo horietako batzuek arrakastarik ez izatea, deposizio-eremuan eremu magnetikoaren indarraren murrizketa eragiten baitute.Horrela, 30 graduko iman bakarreko konfigurazioa (3a. irudia) in vivo probatzeko metodorik errazena eta eraginkorrena da.
LV-MP azterketak erakutsi zuen LV bektoreak CombiMag-ekin konbinatu eta eremu magnetiko baten aurrean fisikoki asaldatu ondoren entregatu zirenean, transdukzio-mailak nabarmen handitu zirela trakean kontrolekin alderatuta.Sinkrotroi irudien ikerketetan eta LacZ emaitzetan oinarrituta, eremu magnetikoak LV trakean mantentzeko eta biriketan berehala sartzen ziren partikula bektorialen kopurua murrizteko gai zela zirudien.Bideratze-hobekuntza horiek eraginkortasun handiagoa ekar dezakete entregatutako tituluak, helburu gabeko transdukzioa, hanturazko eta immunitate-albo-ondorioak eta gene-transferentzia-kostuak murrizten dituzten bitartean.Garrantzitsuena, fabrikatzailearen arabera, CombiMag beste gene-transferentzia metodo batzuekin batera erabil daiteke, besteak beste, beste bektore biral batzuk (adibidez, AAV) eta azido nukleikoekin.